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免疫熒光(冰凍-單標)/免疫熒光(石蠟-單標)

免疫熒光 

       免疫熒光技術又稱為熒光抗體技術,將熒光標記技術和免疫學方法結合起來,利用抗原抗體相互作用從而對組織或細胞內的 抗原或抗體物質進行定位、示蹤、定性以及相對定量等。 

實驗意義

1.免疫熒光技術特異性強、敏感性高、反應速度快、結果清晰明確,在臨床檢驗和科學研究工作上有很高的應用價值。 

2.操作簡便,便于推廣。 


實驗步驟 

1.石蠟切片免疫熒光: 

①烘箱內進行烘片,然后將切片進行常規脫蠟至水; 

②抗原修復:使用水浴鍋或電爐煮沸熱修復,或者中檔微波修復,緩沖液為0.01M檸檬酸鈉緩沖液(pH6.0); 

③去除內源性酶:3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性后,PBS清洗3次×3 min; 

④封閉:5~10%正常血清封閉30 min; 

⑤一抗孵育:稀釋好的一抗4℃孵育過夜,PBS清洗3次×3 min; 

⑥二抗孵育:將稀釋好的帶熒光標記的二抗,搖床緩慢孵育1 h,PBS清洗3次×3 min; 

⑦DAPI復染核,PBS清洗3次×3 min; 

⑧封片:Mounting Medium封片,凝固后拍照。(多重熒光染色:可使用綠色熒光、紅色熒光和藍色熒光進行三重熒光染 色)。 

2.冰凍切片免疫熒光: 

①新鮮組織經處理后,立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 μm; 

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h; 

③4℃純丙.酮10 min處理,風干; 

④PBS漂洗3次×10 min; 

⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min; ④PBS漂洗3

次×5 min; 

⑥去除內源性酶;封閉,一抗孵育、二抗孵育、復核染、封片等與石蠟切片的處理類似,同樣也可做多重熒光染色。

結果展示


實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期:1-2周 

2.交付標準:蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等) 需確認的信息 1.是做石蠟切片還是冰凍切片(推薦做石蠟切片) 2. 樣本的種屬和類型,是組織還是細胞? 

3.樣本的數量 

4.是否提供一抗,我方可代購 

5.半定量分析要求 

6. 拍照要求


收費標準/服務周期/提供結果: 

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

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