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細胞轉染

實驗技術原理: 

細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。 


因為不同的細胞在生理代謝及分裂上均存在差異,因此研究者將外源遺傳物質導入細胞的過程中需要選擇不同的方式。目前,將外源物質導入細胞的方法主要分為三大類: 

1、脂質體(或是脂質體替代物)轉染; 

2、電轉; 

3、病毒感染。

這三種方法互有優劣。脂質體或是脂質體替代物轉染操作簡便,價格低廉,但是對細胞毒性大。而且,有些細胞通過脂質體轉染效率很低;電轉操作方便快捷,但是需要專門的儀器,對細胞損傷也比較大;病毒感染克服了前兩者的劣勢,感染效率高,對細胞毒性小,但是病毒前期包裝需要大量的時間和精力。 


實驗操作流程:

1、轉染試劑的準備

a. 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。 

b. 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。 

2、選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體[1] 體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體 積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震蕩。 

3、將混合液在室溫放置10-15分鐘。 

4、吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。 

5、加入混合液,將細胞放回培養箱中培養一個小時。 

6、到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。 

客戶提供: 

1、細胞株(可由我們代購) 

2、轉染基因信息、載體、轉染細胞樣本、相關文獻和轉染基因。也可由我們設計并收費合成含轉染基因的質粒。 

3、凍存細胞樣品,以干冰運輸;培養細胞樣品,密封培養瓶灌滿生長培養基運輸。

交付標準: 

1、轉染細胞株

2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果)

其他: 細胞轉染時DNA量如果比較多,轉染時培養基中如果有抗生素,是否會導致細胞死亡。 


收費標準/服務周期/提供結果: 

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電咨詢! 


做實驗,找碩璽!您的科研生涯,我們一路相伴! 

【平臺項目開展范圍】慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組 學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導等服務。 

【碩璽生物】已開展了數千個實驗外包項目。我們專注于醫學課題研究,已從課題申請、方案設計、試劑采購、模型構造、 標本檢測、數據分析,各個環節積累了數千個成功案例經驗,為數千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關實驗服務信息請咨詢碩璽生物。

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