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雙熒光素酶報告基因檢測介紹 

實驗原理 

miRNA通過堿基配對結合到靶mRNA的3’UTR區(qū)，抑制靶基因的翻譯或對靶基因mRNA的降解達到調(diào)控基因表達的目的。將靶mRNA的3’UTR區(qū)構建至螢火蟲熒光素酶報告基因的3’端，與miRNA表達載體及海腎熒光素酶報告基因載體共轉染細胞，先后加入兩種底物熒光素，通過對熒光素酶報告基因的表達檢測確認 miRNA對靶基因的調(diào)控效果。

下圖為雙熒光素酶報告基因檢測載體的示意圖。

技術應用 

通過miRNA靶標的鑒定從而進行miRNA功能的深入研究。

實驗流程

實驗結果展示

圖 1 hsa-miR-9-1 的靶點

篩選結果

1）四組質(zhì)粒的 293 細胞共轉染后的細胞照片；

2）四組細胞的雙熒光素酶報告基因檢測柱形圖。 

注：WT為野生型3'UTR 區(qū)的螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒，Mut為突變型3'UTR 區(qū)的螢火蟲熒光素酶報 

告基因質(zhì)粒，結果表明待研究的 miRNA 對靶基因有較明顯的調(diào)控作用。