ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合 起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種 試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法 以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法 服務(wù)。
技術(shù)流程
雙抗體夾心法(檢測未知抗原)
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml， 4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔 中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及 陽性對照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴 定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液 0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏 色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上， 于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測 各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法(檢測未知抗體)
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加 0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述 已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空 白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二 抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一 遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底 物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果： 反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD 值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則 410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī) 定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
結(jié)果展示：
實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn) ：
1.實驗周期：1-3天
2.交付標(biāo)準(zhǔn)：ELISA檢測原始OD值、ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線、ELISA檢測目的蛋白濃度值、柱狀圖、實驗報告（實驗步驟、試 劑、儀器等）
客戶須知
1、液體類標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等）；
2、樣本保存：請盡早檢測，2-8℃保存一天；需更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集樣本，請將樣本及時 分裝標(biāo)號后，置-20℃或-70℃保存；
3、請?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬、樣本數(shù)量、待測指標(biāo)及其他特殊要求。
報告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)
1、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線；
2、詳細(xì)的實驗步驟；
3、完整的實驗報告（試劑耗材，實驗方法，實驗結(jié)果及結(jié)果說明）。
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