TUNEL凋亡熒光實驗原理
dUTP 缺口末端標(biāo)記（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL ）法檢測細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時， DNA內(nèi)切酶被激活，核小體間的基因組DNA被切斷，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）加上帶有熒光素FITC標(biāo)記的dUTP，從而可以通過熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。
TUNEL凋亡熒光實驗意義
1.TUNEL法是一種分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，可對完整的單個凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色，可以準(zhǔn)確 反映細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。
3.操作簡便快捷，在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。
TUNEL凋亡熒光實驗步驟：
1.石蠟切片TUNEL顯色法：
①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，脫蠟劑二甲苯，至水劑乙醇；
②PBS漂洗3×5 min；
③加入蛋白酶K工作液37℃反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3×5 min；
④4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定15-30 min，PBS漂洗3×5 min；
⑤浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min；
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標(biāo)記液、TUNEL檢測液；
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37℃避光孵育60 min，PBS漂洗3×5 min；
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核；
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。
2.冰凍切片TUNEL顯色法：
①新鮮組織經(jīng)處理后，立即在恒冷冰凍切片機內(nèi)切片，厚度為5~6 μm；
②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h；
③4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定10 min，PBS漂洗3×5 min；
④浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min；
⑤浸入通透液（0.1%Triton X-100溶于PBS中），室溫通透30 S-2 min；
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標(biāo)記液、TUNEL檢測液
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37°C避光孵育60min，PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。
實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實驗周期：1-2周
2.交付標(biāo)準(zhǔn)：蠟塊、切片、染色圖片、實驗報告（實驗步驟、試劑、耗材等）
需確認(rèn)的信息
1.樣本的種屬
2.樣本的類型（固定的組織or蠟塊or切片）
3.是否提供試劑盒
4.拍照要求
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
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